Multispectral High-Resolution Fluorescence Imaging System (Fast Spinning Disk Two Cameras Nikon System)

Medizinische Universität Graz

Graz | Website

Open for Collaboration

Kurzbeschreibung

Anwendungsbereiche:
Das Multi-Spektral-Hochauflösungs-Fluoreszenzbildgebungssystem (Schnelles-Spinning Disk-Zwei-Kamera-Nikon-System) ist ideal geeignet, um schnelle Prozesse wie Ionenveränderungen in einzelnen lebenden Zellen und ihren subzellulären Strukturen, einschließlich Zellorganellen wie Mitochondrien, fluoreszenzmikroskopisch sichtbar zu machen. Darüber hinaus kann das System effektiv für Multiplexing-Anwendungen verwendet werden, bei denen mehrere Fluorophore mit unterschiedlichen spektralen Eigenschaften (> 4) gleichzeitig erfasst werden können. Es eignet sich auch für die Messung von Förster-Resonanz-Energieübertragungs (FRET)-basierten Biosensoren, wie z. B. CYF-YFP und GFP-RFP FRET-Paaren, sowie Singlefluoreszenzproteine (FP)-basierte Biosensoren mit verschiedenen Farben (blau, grün, gelb, orange, rot).

Technische Systembeschreibung:
Das System basiert auf einem inversen Nikon Ti2-Mikroskop mit spezieller Optik für ein großes Sehfeld von 35 mm. Es besteht aus einem Weitfeld-Epi-Fluoreszenzteil mit einer LED-Lichtquelle (CoolLED pE800 MB) mit Wellenlängen von 400 nm, 435 nm, 470 nm, 500 nm, 550 nm, 580 nm, 625 nm und 740 nm. Zusätzlich verfügt es über einen konfokalen Teil mit einem schnellen Spinning-Disk-Array Teil (Crest X-Light V3) und 7 Laserlinien (Lumencor Celesta) mit Wellenlängen von 405 nm, 446 nm, 477 nm, 520 nm, 546 nm, 638 nm und 749 nm. Derzeit verfügt das System über ein 100x Öl-Objektiv, ein 40x Wasser-Objektiv sowie ein 20x Luft-Objektiv. Das System ist mit zwei schnellen sCMOS-Kameras (Photometrics Kinetix; 3200 x 3200, 6,5 µm Pixelgröße; QE > 95%, F-Mount; 498 fps bei 8-Bit, 83 fps bei 16-Bit) ausgestattet.

Zusätzliche Ausstattung:
Zusätzlich verfügt das Bildgebungssystem über ein schwerkraftgetriebenes 9-Kanal-Perfusionssystem (NGFI GmbH), eine Vakuumpumpe und einen sogenannten Stage-Inkubator zur Temperatur- und CO2-Kontrolle, um Inkubatorbedingungen direkt am Mikroskop zu schaffen.

Ansprechperson

Roland Malli

Research Services

Zugang über Core Facility oder wissenschaftliche Einheit.

Methoden & Expertise zur Forschungsinfrastruktur

Unsere Forschungsinfrastruktur integriert das Multi-Spektral-Hochauflösungs-Fluoreszenzbildgebungssystem (Schnelles-Spinning Disk-Zwei-Kamera-Nikon-System) mit einem umfangreichen Fachwissen in der medizinisch-naturwissenschaftlichen Grundlagenforschung. Dieses System ermöglicht die Untersuchung schneller Prozesse wie Ionenveränderungen in einzelnen lebenden Zellen und ihren subzellulären Strukturen, einschließlich Zellorganellen wie Mitochondrien. Durch unsere langjährige Erfahrung in der Entwicklung und Anwendung von Biosensoren sind wir in der Lage, die Leistungsfähigkeit dieses Systems optimal zu nutzen. Insbesondere haben wir uns auf Multiplexing-Anwendungen spezialisiert, bei denen mehrere Fluorophore mit unterschiedlichen spektralen Eigenschaften gleichzeitig erfasst werden können.

Darüber hinaus nutzen wir erfolgreich Förster-Resonanz-Energieübertragungs (FRET)-basierte Biosensoren sowie einzelne Fluoreszenzproteine (FP)-basierte Biosensoren mit verschiedenen Farben. Unsere Arbeit mit dieser fortschrittlichen Forschungsinfrastruktur und unserem fundierten Fachwissen hat dazu beigetragen, wichtige Erkenntnisse in der medizinisch-naturwissenschaftlichen Grundlagenforschung zu erlangen und potenziell innovative Ansätze zur Diagnose und Behandlung von Krankheiten zu entwickeln.