Universität für Bodenkultur Wien (BOKU)
Wien
Kurzbeschreibung
Der MoFlow Astrios EQ ist ein ultraschneller high-end Cell Sorter, der bis zu 30.000 Sortierergebnisse pro Sekunde liefern kann. Das Gerät dient der quantitativen und qualitativen Charakterisierung sowie Sortierung von Zellpopulationen (Hefe-, Bakterien-, Pflanzen-und Säugerzellen).
Ansprechperson
Karin Kohlweiss
Research Services
Bitte um Kontaktaufnahme per email unter bmca@boku.ac.at
Methoden & Expertise zur Forschungsinfrastruktur
Der MoFlow Astrios EQ Cell Sorter ist mit 5 Lasern ausgestattet (488 nm, 561 nm, 638 nm, 405 nm und zusätzlich ein 355 nm UV-Laser). Das Gerät bietet die Möglichkeit in Tubes sowie auch in Platten zu sortieren. Es können bis zu 6 verschiedene Populationen gleichzeitig gesortet werden (Eppendorfcups, 5 ml, 15 ml sowie 50 ml Tubes). Poolsorting aber auch Einzelzellsortierung in Microtiterplatten (6, 12, 24, 48, 96, 384 sowie 1536 well) wird unterstützt. Die Probe aber auch die sortierten Zellen können bei Bedarf temperaturkonstant gehalten werden (5°- 37°C). Die Zellen bzw. Partikel werden einzeln in einer Mantelflüssigkeit (gepufferte Salzlösung) in hoher Geschwindigkeit an den 5 verschiedenen Lasern vorbeigeführt. Das je nach Form, Größe, Struktur und/oder Färbung der Zelle entstehende Streulicht und Fluoreszenzsignal wird mit Hilfe von Filtern und PMT’s detektiert. Während das Signal im Forward Scatter Auskunft über die Größe geben kann, ist das Signal im Side Scatter ein Maß für die Komplexität bzw. Granularität der Zellen. Mit Hilfe von Farbstoffen, die an bestimmte Zellbestandteile direkt binden oder mit Antikörpern, die mit einem Fluoreszenzfarbstoff markiert sind, kann ein Fluoreszenzsignal erzeugt werden und aufgrund dessen sortiert werden. Um die Zellen zu sortieren, werden positive oder negative Ladungen auf die Mantelflüssigkeit aufgebracht, gleichzeitig kommt es mit Hilfe eines Piezzokristalls und dessen Vibration zur Brechung des geladenen Flüssigkeitsstroms in Tropfen. Diese werden dann durch Deflektionsplatten zum gewünschten Ort / in den gewünschten Auffangbehälter abgelenkt.